减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立

根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μm01·L-1,内引物浓度0.8 μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 ...     

建立环介导间接PCR同时检测3种主要猪源性病毒

 【目的】建立同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的环介导间接PCR方法,实现3种病毒快速检测。【方法】根据GenBank数据库中猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的核苷酸序列设计3对特异性探针,利用PCR技术分别标记于大豆Lectin基因片段的两端形成3种不同的报告基因,此标记的报告基因与3种待测靶标基因经杂交、缺口补平、环化后,采用1对引物反向PCR扩增报告基因,建立了PCV2、CSFV和PRRSV的环介导间接PCR检测方法,扩增片段大小分别为564 bp、434 bp和338 bp,该方法即可用于单病毒检测又可用于多病毒检测。【结果】灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单病毒检测还是多病毒检测,该法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒同时检测的底限分别为0.8、25和6.2 pg•μL-1,和单个病毒的检测灵敏度相同。利用环介导间接PCR和常规PCR对20份临床样本进行比较检测,结果表明,无论单病毒检测还是多病毒检测,其结果均与常规PCR检测结果完全一致。【结论】环介导间接PCR检测技术可用于PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒的同时检测,是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具。     

,y康汤对复治性肺结核阴虚毒癖证疗效及 T淋巴细胞的影响

〔摘要〕目的研究傍康汤对复治性肺结核阴虚毒疲证患者T淋巴细胞的影响、方法将%例阴虚毒疲型复治 性肺结核患者随机分为两组:治疗组48例和对照组48例,并设立正常组48例;对照组采用西医常规治疗,治疗组 在西医常规治疗基础上加服傍康汤,2周为1个疗程,共治疗12个疗程〔观察两组临床疗效及对CD,'',CD,'',CDH''1'' 淋巴细胞、CD,''/CDH+比值的影响〔结果治疗组总有效率为89.60Io,与对照组66.7%比较,差异有显著统计学意义(P< 0.01);两组CD,'',CDH''1''淋巴细胞、C D,''/C DH+比值治疗前与正常组比较有显著差异}P<0.01),治疗后与治疗前比较 C D,'' T淋巴细胞、CD,''/CDH+比值明显升高,CDH'' T淋巴细胞则明显卜降,差异有统计学意义(P<0.05 ) ;治疗后治疗组 CD,'',CD,''/CDH''比值的升高、CDH''的h降均优于对照组(P<0.05 )〔结论傍康汤治疗阴虚毒疲型复治性肺结核疗效确 切,其机制可能是通过改善患者T淋巴细胞免疫功能而起作用、     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5、M蛋白基因的克隆及其基因疫苗构建

参照GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型代表株VR2332 GP5和M蛋白基因序列,设计并合成2对引物,用RT-PCR方法分别扩增出PRRSV野毒株GP5和M蛋白基因603,525bp片段,并将其分别克隆到pMD18-T载体。测序正确后,将GP5和M蛋白基因分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1上,成功构建基因疫苗表达载体pEGP5-C1和pEM-C1。小鼠免疫试验证实,这些基因疫苗质粒可以诱导小鼠产生特异性抗体,并在二免后1周开始检测到特异性淋巴细胞增殖反应。     

Fournier's gangrene in a cat

Objective – To describe the clinical course of a cat diagnosed with Fournier's gangrene.
Case Summary – A 2-year-old castrated male cat was presented to an emergency hospital for evaluation of acute onset of lethargy, mucoid anal discharge, and fever. During hospitalization, with provision of supportive care, an area of necrotizing fasciitis around the prepuce and anus developed and surgical debridement was performed. Severe sepsis developed secondary to the necrotizing fasciitis and the cat was eventually euthanized.
New Information Provided – The purpose of this report is to document the first case of Fournier's gangrene in a cat that presented for mucoid anal discharge, lethargy, and mild ataxia, and to alert emergency clinicians to this disease process. Early detection of the disease with prompt, aggressive supportive care and surgical debridement is necessary for successful treatment.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

[目的]克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因并在原核表达系统中表达。[方法]根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核酸序列设计1对引物,用RT—PCR方法扩增出PRRSV的核衣壳蛋白（N）基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T．1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-N。将重组质粒转化大肠杆菌BL31（DE3）感受态细胞,经TPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测。[结果]PRRSV肺组织所提取的RNA,经RT—PCR扩增,得到一段392bp的片段,与预期结果一致。SDS—PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约39．866Da,与预期结果相同。重组菌体超声裂解后,经10％的SDS—PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为可溶性蛋白。     

含CpG序列PRRSV ORF5重组质粒在小鼠细胞中的免疫

为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,将成功构建含CpG序列PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1- ORF5免疫SPF小鼠,检测小鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平.结果表明,构建的含CpG序列真核重组表达质粒CpG-pVAX1- ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫.     

卧位型心绞痛合并阻塞型睡眠呼吸暂停综合征80例临床分析

目的探讨卧位型心绞痛与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）的关系,以及临床干预呼吸睡眠对卧位型心绞痛合并阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）的影响．方法将80例卧位型心绞痛合并阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）患者随机分为两组,研究组在给予常规药物治疗的基础上,给予呼吸睡眠干预,对照组仅给予常规药物治疗．对两组患者的症状缓解情况和心电图改善、恶化等情况进行比较分析．结果研究组患者在症状改善、血压控制满意率、夜间动态心电图检测心肌缺血发生率、心电图改变、心肌梗死发生率、心绞痛发作频率、射血分数（LVEF）、心律失常发生率等方面与对照组比较,差异均有显著性（P〈0．05）．结论临床干预呼吸睡眠可改善OSAS的预后．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单股正链RNA病毒。其基因组长约15kb,含有8个开放的阅读框架（ORFs）。PRRSV基因组的顺序依次为：5’-ORFla-ORFlb-ORF（2—6）．ORFT-3’。鲁韦韦等分析表明,PRRSV的ORF7基因保守性较好,变异较小。此外,ORF7编码的核衣壳蛋白（N蛋白）具有良好的免疫原性及反应原性,机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的。因此,N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析

[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。